Современные подходы к диагностике гемостаза (2)
Второй этап - преаналитический
Преаналитический этап исследования гемостаза включает в себя получение пробы крови, ее стабилизацию и выделение образцов плазмы.
Выбор лабораторной посуды
Известно, что отрицательно заряженная поверхность стекла активирует процесс свертывания крови. Ранее для исследования гемостаза стеклянную посуду приходилось обрабатывать специальным веществом - силиконом. Однако процедура силиконирования очень трудоемкая и требует работы под вытяжкой. Поэтому в последнее время широкое распространение получили пластиковые пробирки (например, пробирки для коагулологии с 3,8% цитратом натрия Vacuette) и автоматические пипетки. Им следует отдавать предпочтение, поскольку они не нуждаются в силиконировании, лучше калиброваны и легко маркируются.
Техника взятия крови
Лабораторная диагностика нарушений гемостаза весьма чувствительна к соблюдению известных правил взятия, хранения и подготовки крови для исследования. Неверное соотношение крови с раствором 3,8% цитрата натрия, недостаточное их смешивание, длительный временной промежуток от венепункции до исследования и ряд других причин неизбежно ведут к "внутрипробирочному" свертыванию крови или при передозировке антикоагулянта к ложной гипокоагуляции. Следовательно, принципиально важен также "входной" контроль крови перед проведением ее исследования. Этот контроль должен включать в себя:
- проверку маркировки пробы с обязательным указанием времени забора крови;
- контроль достаточности полученного объема крови по метке на пробирке, соответствия стабилизатора гематокриту;
- контроль на возможное спонтанное свертывание крови, который проводят, медленно наклоняя пробирку в горизонтальной плоскости. Стабилизированная кровь не должна иметь сгустков и плотных образований.
Центрифугирование
Соблюдение режима центрифугирования особенно критично для диагностики нарушений тромбоцитарного гемостаза (исследование богатой тромбоцитами плазмы), фибринолиза и выполнения фосфолипид-чувствительных тестов (исследование бедной тромбоцитами плазмы), например, для выявления волчаночного антикоагулянта при диагностике антифосфолипидного синдрома.
Богатую тромбоцитами плазму получают центрифугированием при 140-160 g в течение 5-7 мин.
Бедную тромбоцитами плазму получают повторным центрифугированием при 1200-1400 g в течение 15 мин.
Частоту вращения необходимо рассчитать с учетом радиуса ротора центрифуги, указанного в паспорте прибора, по формуле:
f=300х√g/R
где f - частота вращения (об./мин);
g - эффективное ускорение;
R - радиус ротора центрифуги (см).
А.Н.Шибанов
канд. физ.-мат. наук, генеральный секретарь РАМЛД, член правления РАПСКЛД, генеральный директор А/О Юнимед
продолжение следует