Лабораторная диагностика сифилиса (1)

Реакция иммобилизации бледных трепонем

   Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) была предложена R, Nelson и М. Mayer в 1949 г. Антигеном служат живые патогенные блед­ные трепонемы штамма Nichols, полученные из 7-10-дневного кроличье­го орхита. В основе этой реакции лежит феномен обездвиживания блед­ных трепонем антителами сифилитической сыворотки (иммобилизинами) в присутствии активного комплемента морской свинки. Сыворотки крови обследованных с ложноположительными результатами стандартных се­рологических реакций не вызывают иммобилизацию бледных трепонем вследствие того, что содержат только реагины и не включают специфиче­ские антитрепонемные антитела.

  Кровь берут стерильно в простерилизованную пробирку. Обязатель­ным условием является исключение перед обследованием приема боль­ным антибиотиков, которые оказывают токсическое действие на бледные трепонемы, вызывая их неспецифическое обездвижение. При содержании антибиотиков в сыворотке крови нарушается воспроизводимость реакции. Перед исследованием сыворотку крови инактивируют для разрушения возможно присутствующего в ней компонента, обусловливающего неспе­цифическую иммобилизацию, который может присутствовать в активных сыворотках крови.

  Антиген для РИБТ представляет собой взвесь бледных трепонем в сре­де выживания с количеством микроорганизмов 10-15 в каждом поле зре­ния. РИБТ протекает только при условии избытка комплемента. Для по­становки РИБТ применяются классическая методика с использованием газового меланжа для создания оптимальных условий выживания блед­ных трепонем и меланжерная методика, анаэробные условия при которой достигаются с помощью резинового кольца, закрывающего оба просвета меланжера. Через 18-20 ч после постановки реакции подсчитывают по­движные и неподвижные бледные трепонемы. Иммобилизация бледных трепонем от 0 до 20% соответствует отрицательным результатам реакции, от 21 до 30 - сомнительным, от 31 до 50 - слабоположительным, от 51 до 100% - положительным.

  Процент иммобилизации - соотношение числа подвижных и непо­движных трепонем в опыте (активный комплемент) и контроле (неактив­ный комплемент) - рассчитывается следующим образом:

Х = А – Б / А * 100%,

где  А - количество подвижных трепонем в контроле;

        Б - количество подвижных трепонем в опыте;

        X - процент иммобилизации.

  Положительные результаты РИБТ обнаруживаются примерно с сере­дины вторичного свежего периода сифилиса и могут длительно сохранять­ся после проведенного лечения. При необходимости реакция воспроиз­водится со спинномозговой жидкостью, обнаруживая при этом высокую специфичность, но низкую чувствительность (порядка 40%).

  РИБТ не лишена недостатков: мало пригодна для диагностики ранних форм сифилиса ввиду позднего (не ранее 8-9 недель от момента заражения) появления антител - иммобилизинов; она может давать ложноположительные результаты, в особенности у больных с аутоиммунной патологией, зло­качественными заболеваниями, диабетом [2]. Кроме того, РИБТ – достаточно сложный, трудоемкий и дорогостоящий анализ, требующий высокой квалификации персонала и наличия вивария, в связи с чем в последние годы он проводится лишь в отдельных лабораториях. В диагностике РИБТ используется как реакция -"арбитр" при расхождении результатов других серологических тестов, для дифференцирования ложноположительных ре­зультатов и установления диагноза поздних форм сифилиса.

   Методика постановки РИБТ изложена в приказе Минздрава России от 26.03.2001 № 87 "О совершенствовании серологической диагностики сифи­лиса" (далее - Приказ № 87).

Реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном

   Реакция связывания комплемента с антигеном (РСК с ТА) из культуральных бледных трепонем штамма Рейтера в качестве специфического трепонемного теста была разработана S. D'Alessandro с соавт. в 1953 г. Поз­же была предложена постановка реакции с ультраозвученным антигеном Treponema pallidum. Чувствительность реакции - около 80%, специфич­ность - 98%. Реакция входила в состав комплекса стандартных серологи­ческих реакций на сифилис, регламентированного приказом Минздрава СССР от 02.09.1985 № 1161 "О совершенствовании серологической диагно­стики сифилиса". В настоящее время использование этой реакции, как и ре­акции связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном, ограниче­но отдельными лабораториями.

O.K. Лосева д-р мед. наук, проф.,

Ю.Ю. Устьянцев врач-ординатор

Государственный институт усовершенствования врачей Минобороны России (ГИУВ МО РФ)

Л.Б. Важбин главный врач,

 Н.А.Кузнецова зав. клинико-диагностической лабораторией  -врач клинической лабораторной диагностики,

А.Р. Колесова врач клинической лабораторной диагностики

Московский областной кожно-венерологический диспансер

продолжение следует