Лабораторная диагностика сифилиса (2)
Реакция иммунофлюоресценции
Принцип реакции иммунофлюоресценции (РИФ) разработали Т. Weller и A. Coons в 1954 г. W Deacon, V. Falcone, A. Harris в 1957 г. применили ее для выявления противотрепонемных антител. В клинической практике для серодиагностики сифилиса ее впервые использовали L. Borel и P. Du-rel в 1959 г. В нашей стране работы по изучению РИФ начались под руководством В.Н. Бедновой и Н.М. Овчинникова с 1960 г.
Принцип реакции заключается в том, что исследуемой сывороткой обрабатывается антиген - бледная трепонема штамма Никольса, полученная из орхита кролика, высушенная на предметном стекле и зафиксированная ацетоном. После промывания препарат обрабатывается конъюгатом - люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов человека. Флуоресцирующий комплекс связывается с человеческим иммуноглобулином на поверхности бледной трепонемы и может быть идентифицирован методом люминесцентной микроскопии.
Для серодиагностики сифилиса используются несколько модификаций РИФ:
- РИФ-ц - используется для ликвородиагностики сифилиса, применяют цельный ликвор. Является высокочувствительной и специфичной реакцией;
- РИФ-200 - испытуемую сыворотку перед реакцией разводят в 200 раз; в этой модификации значительно повышена специфичность реакции, которая приближается к РИБТ;
- РИФ-абс (реакция иммунофлуоресценции с абсорбцией) - групповые антитела удаляются из исследуемой сыворотки с помощью разрушенных ультразвуком культуральных трепонем штамма Рейтера, что резко повышает специфичность реакции. Так как исследуемая сыворотка разводится только 1:5, то модификация сохраняет высокую чувствительность. По чувствительности и специфичности РИФ-абс не уступает РИБТ, но намного проще в постановке. РИФ-абс становится положительной с 3-й недели после заражения (до появления твердого шанкра или одновременно с ним) и является методом ранней серодиагностики сифилиса. Нередко сыворотка остается положительной и спустя много лет после полноценного лечения раннего сифилиса, а у больных с поздним сифилисом - на протяжении десятилетий.
Показания для постановки РИФ-абс:
- положительные результаты НТТ у беременных при отсутствии клинических и анамнестических данных, свидетельствующих о сифилисе;
- обследование лиц с различными соматическими и инфекционными заболеваниями, дающих положительные результаты в НТТ;
- обследование лиц с клиническими проявлениями, характерными для сифилиса, но с отрицательными результатами в НТТ;
- ранняя диагностика сифилиса;
- в части случаев - как критерий успешности противосифилитического лечения: переход положительной РИФ-абс в отрицательную после лечения является стопроцентным критерием излеченности сифилиса;
- реакция IgM-РИФ-абс - у больных ранним сифилисом в первые недели болезни появляются IgM, а в более поздние сроки болезни преобладают IgG. Раздельное изучение классов Ig представляет особый интерес при серодиагностике врожденного сифилиса, где противотрепонемные антитела, синтезированные в организме ребенка, представлены IgM, a IgG имеют материнское происхождение. Реакция IgM-РИФ-абс основана на использовании конъюгата анти-IgM.
Показаниями к постановке этой реакции являются: (при постановке этой реакции в редких случаях могут наблюдаться ложноположительные и ложноотрицательные результаты.)
- серодиагностика врожденного сифилиса, т. к. реакция позволяет исключить IgG материнского происхождения, которые проходят через плаценту и могут обусловить ложноположительный результат РИФ- абс при отсутствии у ребенка активного сифилиса;
- оценка результатов лечения раннего сифилиса: при полноценном лечении IgM-РИФ-абс негативируется.
РИФ обладает высокой чувствительностью (98,5%) и специфичностью (99,6%) практически при всех формах сифилиса.
Результаты РИФ оценивают следующим образом: положительными считают сыворотки крови, которые дают свечение на 4+, 3+ и 2+. Блестящее зелено-желтое свечение оценивается на 4+, яркое - на 3+, слабое свечение - на 2+. Отрицательными считают сыворотки, которые дают свечение на 1+ (трепонемы в препарате окрашены немного интенсивнее фона или не окрашены). В зарубежной практике результаты РИФ оцениваются по шкале с меньшей градацией, а именно как "реактивные" "слабо реактивные" и "нереактивные" или "с наблюдаемым атипичным свечением". Рекомендуется повторное тестирование "слабо реактивных" проб сывороток с 1-2-недельным интервалом.
Недостатками РИФ являются: невозможность автоматизирования постановки реакции и учета результатов; трудности в приготовлении качественного антигена из взвеси бледных трепонем, полученных из яичка зараженного кролика; субъективизм в оценке результатов, что требует опыта и высокой квалификации специалиста. Методика постановки РИФ для серо - и ликвородиагностики сифилиса (РИФ-абс, РИФ-200, РИФ-ц) изложены в Приказе № 87 (приложение 2).
O.K. Лосева д-р мед. наук, проф.,
Ю.Ю. Устьянцев врач-ординатор
Государственный институт усовершенствования врачей Минобороны России (ГИУВ МО РФ)
Л.Б. Важбин главный врач,
Н.А.Кузнецова зав. клинико-диагностической лабораторией -врач клинической лабораторной диагностики,
А.Р. Колесова врач клинической лабораторной диагностики
Московский областной кожно-венерологический диспансер
продолжение следует