Лабораторная диагностика сифилиса (2)

Реакция иммунофлюоресценции

    Принцип реакции иммунофлюоресценции (РИФ) разработали Т. Weller и A. Coons в 1954 г. W Deacon, V. Falcone, A. Harris в 1957 г. применили ее для выявления противотрепонемных антител. В клинической практике для серодиагностики сифилиса ее впервые использовали L. Borel и P. Du-rel в 1959 г. В нашей стране работы по изучению РИФ начались под руковод­ством В.Н. Бедновой и Н.М. Овчинни­кова с 1960 г.

    Принцип реакции заключается в том, что исследуемой сывороткой об­рабатывается антиген - бледная трепонема штамма Никольса, полученная из орхита кролика, высушенная на предметном стекле и зафиксированная ацетоном. После промывания препа­рат обрабатывается конъюгатом - люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов человека. Флуо­ресцирующий комплекс связывается с человеческим иммуноглобулином на поверхности бледной трепонемы и может быть идентифицирован методом люминесцентной микроскопии.

    Для серодиагностики сифилиса используются несколько модификаций РИФ:

-  РИФ-ц - используется для ликвородиагностики сифилиса, применяют цельный ликвор. Является высокочувствительной и специфичной ре­акцией;

- РИФ-200 - испытуемую сыворотку перед реакцией разводят в 200 раз; в этой модификации значительно повышена специфичность реакции, которая приближается к РИБТ;

- РИФ-абс (реакция иммунофлуоресценции с абсорбцией) - групповые антитела удаляются из исследуемой сыворотки с помощью разрушен­ных ультразвуком культуральных трепонем штамма Рейтера, что резко повышает специфичность реакции. Так как исследуемая сыворотка разво­дится только 1:5, то модификация сохраняет высокую чувствительность. По чувствительности и специфичности РИФ-абс не уступает РИБТ, но намного проще в постановке. РИФ-абс становится положительной с 3-й недели после заражения (до появления твердого шанкра или одновремен­но с ним) и является методом ранней серодиагностики сифилиса. Нередко сыворотка остается положительной и спустя много лет после полно­ценного лечения раннего сифилиса, а у больных с поздним сифилисом - на протяжении десятилетий.

    Показания для постановки РИФ-абс:

- положительные результаты НТТ у беременных при отсутствии клинических и анамнестических данных, свидетельствующих о сифилисе;

- обследование лиц с различными соматическими и инфекционными заболеваниями, дающих положительные результаты в НТТ;

- обследование лиц с клиническими проявлениями, характерными для сифилиса, но с отрицательными результатами в НТТ;

- ранняя диагностика сифилиса;

- в части случаев - как критерий успешности противосифилитического лечения: переход положительной РИФ-абс в отрицательную по­сле лечения является стопроцентным критерием излеченности си­филиса;

- реакция IgM-РИФ-абс - у больных ранним сифилисом в первые недели болезни появляются IgM, а в более поздние сроки болезни преоблада­ют IgG. Раздельное изучение классов Ig представляет особый интерес при серодиагностике врожденного сифилиса, где противотрепонемные антитела, синтезированные в организме ребенка, представлены IgM, a IgG имеют материнское происхождение. Реакция IgM-РИФ-абс осно­вана на использовании конъюгата анти-IgM.

   Показаниями к постанов­ке этой реакции являются: (при постановке этой реакции в редких случаях могут наблюдаться ложноположительные и ложноотрицательные результаты.)

- серодиагностика врожденного сифилиса, т. к. реакция позволяет ис­ключить IgG материнского происхождения, которые проходят через плаценту и могут обусловить ложноположительный результат РИФ- абс при отсутствии у ребенка активного сифилиса;

- оценка результатов лечения раннего сифилиса: при полноценном лечении IgM-РИФ-абс негативируется.

     РИФ обладает высокой чувствительностью (98,5%) и специфичностью (99,6%) практически при всех формах сифилиса.

     Результаты РИФ оценивают следующим образом: положительными счи­тают сыворотки крови, которые дают свечение на 4+, 3+ и 2+. Блестящее зе­лено-желтое свечение оценивается на 4+, яркое - на 3+, слабое свечение - на 2+. Отрицательными считают сыворотки, которые дают свечение на 1+ (трепонемы в препарате окрашены немного интенсивнее фона или не окрашены). В зарубежной практике результаты РИФ оцениваются по шкале с меньшей градацией, а именно как "реактивные" "слабо реактивные" и "нереактивные" или "с наблюдаемым атипичным свечением". Рекомендуется повторное тести­рование "слабо реактивных" проб сывороток с 1-2-недельным интервалом.

    Недостатками РИФ являются: невозможность автоматизирования по­становки реакции и учета результатов; трудности в приготовлении качест­венного антигена из взвеси бледных трепонем, полученных из яичка зара­женного кролика; субъективизм в оценке результатов, что требует опыта и высокой квалификации специалиста. Методика постановки РИФ для серо - и ликвородиагностики сифилиса (РИФ-абс, РИФ-200, РИФ-ц) изложены в Приказе № 87 (приложение 2).

O.K. Лосева д-р мед. наук, проф.,

Ю.Ю. Устьянцев врач-ординатор

Государственный институт усовершенствования врачей Минобороны России (ГИУВ МО РФ)

Л.Б. Важбин главный врач,

Н.А.Кузнецова зав. клинико-диагностической лабораторией -врач клинической лабораторной диагностики,

А.Р. Колесова врач клинической лабораторной диагностики

Московский областной кожно-венерологический диспансер



продолжение следует