Лабораторная диагностика сифилиса (3)

Реакция пассивной гемагглютинации

    В 1965 г. Т. Rathlev и в 1966 г. Т. Tomizawa предложили в качестве диагно­стического теста на сифилис реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА). Позже, в 1969 г., P.M. Сох с соавт. предложили микромодификацию РПГА. Макромодификацию этой реакции именуют ТРНА, микромодификацию - МНА-ТР, автоматизированный вариант - АМНА-ТР, реакцию с мак­рокапсулами вместо эритроцитов - МСА-ТР.

     В нашей стране Г.Ф. Тимченко, Н.Н. Басова, Б.Н. Беднова разработа­ли отечественный диагностикум для РПГА из патогенных и культуральных бледных трепонем. Сравнитель­ное изучение РПГА с отечественными ингредиентами, РИТ, РИФ-абс, КСР и МРП показало высокую чувствитель­ность и специфичность РПГА при сифилисе, совпадающую с результа­тами РИФ-абс.

   РПГА относится к специфическим трепонемным тестам и заключается в агглютинации эритроцитов, сенсибилизированных трепонемным антиге­ном в присутствии специфических противотрепонемных антител в иссле­дуемой сыворотке. В тестах гемагглютинации используют таннированные формалинизированные эритроциты барана или птиц (последние предпоч­тительнее, т. к. оседают быстрее), покрытые антигенами, полученными из патогенных трепонем (штамм Nichols), а также, как показано в последние годы, из культуральных трепонем (5, 8 и 9 штаммы). Постановка РПГА не требует специального оборудования, за исключением планшета для гемаг­глютинации.

   РПГА ставят в качественном и количественном вариантах, существуют их макро- и микромодификации.

   Постановка реакции максимально проста. Рассмотрим ее на примере набора "Люис РПГА тест" (Россия): в 2 лунки микропланшета вносится по 25 мкл исследуемой сыворотки, разведенной 1:20 прилагаемым к набору бу­фером, затем добавляется по 1 капле (75 мкл) из фиксированной капельницы на флаконе тест-эритроцитов, сенсибилизированных трепонемным антиге­ном, в первую лунку, и контрольных несенсибилизированных эритроцитов в другую лунку. Планшет слегка покачивают и затем оставляют при комнат­ной температуре на 45 мин.

   Результаты РПГА учитывают через 1,5-2 ч для микромодификации и через 2-4 ч или на следующий день для макромодификации. Неподвижно стоящие пластины, даже при высыхании их содержимого, сохраняют кар­тину полученного результата.

Оценка результатов реакции:

++++ - положительная РПГА. Эритроциты равномерно устилают всю поверхность лунки (в виде зонтика); 

+++ - положительная РПГА. Эритроциты устилают всю поверхность лунки, часть их соскальзывает к центру;

++ - слабоположительная РПГА. Эритроциты образуют пленку на не­большом участке;

+ - отрицательная РПГА. Эритроциты ровным "колечком" или "пугов­кой" лежат на самом дне лунки (без окружающего зернистого осажде­ния).

   Количественный метод постановки РПГА с помощью двукратных раз­ведений исследуемой сыворотки позволяет оценить концентрацию специ­фических трепонемных антител в крови.

   РПГА становится положительной, как правило, спустя 3 недели после появления твердого шанкра. Это несколько позже по сравнению с РИФ-абс при первичном сифилисе. Положительной РПГА остается у пациентов, пе­ренесших сифилис, в течение многих лет, нередко пожизненно.

   В зависимости от стадии сифилиса чувствительность РПГА составля­ет 76% при первичном сифилисе, 100% при вторичном сифилисе, 97% при скрытом сифилисе, 94% при позднем сифилисе. Специфичность РПГА оце­нивается выше, чем специфичность РИФ-абс, и составляет 99%.

   Благодаря соотношению высокой специфичности, чувствительности, простоты постановки, стандартизации реагентов и стоимости среди тре­понемных тестов для серодиагностики сифилиса РПГА стабильно заняла лидирующее место в клинической практике в мире. В России применение РПГА регламентировано приказом Минздрава России от 07.12.1993 № 286 "О совершенствовании контроля за заболеваниями, передаваемыми поло­вым путем" (п. 1.11), а также информационным письмом Минздравмед-прома России от 01.12.1995. 

O.K. Лосева д-р мед. наук, проф.,

Ю.Ю. Устьянцев врач-ординатор

Государственный институт усовершенствования врачей Минобороны России (ГИУВ МО РФ)

Л.Б. Важбин главный врач,

Н.А.Кузнецова зав. клинико-диагностической лабораторией -врач клинической лабораторной диагностики,

А.Р. Колесова врач клинической лабораторной диагностики

Московский областной кожно-венерологический диспансер



продолжение следует