Лабораторная диагностика сифилиса (5)

Иммунный блот

    Одним из современных методов диагностики сифилиса является им¬мунный блот (ИБ) (western blot, иммуноблоттинг, вестернблот) для определения IgG- либо IgM-антител. Он сочетает в себе иммуноферментный анализ с предварительным электрофоретическим разделением и переносом на нитроцеллюлозную мембрану (стрип) антигенов бледной трепонемы. ИБ включает в себя несколько стадий. Предварительно очищенная и разрушенная до составных компонентов бледная трепонема подвергается электрофорезу в полиакриламидном или агарозном геле, при этом входящие в ее состав антигены разделяются по молекулярной массе. Затем методом вертикального электрофореза антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый глазом спектр антигенных полос, характерный для бледной трепонемы. При проведении анализа на нитроцеллюлозную полоску (стрип) наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и др.), и если в пробе есть специфические антитела, то в процессе инкубации они прочно связываются со строго соответствующими (комплементарными) им антигенными полосами и образуют комплекс "антиген - антитело". По¬сле удаления несвязавшихся иммуноглобулинов во время отмывания стрипа следует инкубация с конъюгатом - меченными ферментом антителами к иммуноглобулинам человека (антитела к IgG или IgM человека), в ходе которой на поверхности мембраны происходит присоединение к имеющимся комплексам "антиген - антитело" антител, меченных ферментом. После удаления несвязавшегося конъюгата в ходе инкубации с раствором субстрата происходит взаимодействие фермента с субстратом, в результате чего развивается цветная реакция - окрашивание участков мембраны (в виде полос), где располагаются отдельные антигены бледной трепонемы, антитела к которым находились в исследуемой сыворотке. Интенсивность окрашивания зависит от количества связавшихся антител из сыворотки. Результат реакции оценивается визуально. Наличие полос на определенных участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определенным антигенам бледной трепонемы. Метод имеет следующие преимущества: позволяет выявлять антитела к отдельным антигенам бледной трепонемы, обладает высокой чувствительностью (до 100%), высокой специфичностью (98%) и воспроизводимостью (100%). Данный метод дает возможность изучения спектра антител сразу к нескольким антигенам Т. pallidum и оценки вклада в общую реакцию антител различной специфичности, применения высокоочищенных рекомбинантных и пептидных антигенов, снижающих до минимума неспецифическую реактивность сывороток. Возможна автоматизация и документирование данных. Все это определяет возможность предпочтения метода ИБ другим трепонемным тестам для верификации диагноза сифилиса в сложных случаях, в частности для серологической диагностики сифилиса во второй половине инкубационного периода, диагностики скрытого врожденного сифилиса в первые дни жизни ребенка, выявления скрытого сифилиса у лиц со слабым гуморальным ответом, а также для дифференцирования ложноположительных результатов серореакций. ИБ положителен только у больных сифилисом.